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Isolamento, cultura, expansão, caracterização e diferenciação de células-tronco mesenquimais provenientes do periósteo do palato duro de paciente idoso

Artigo apresenta técnica minimamente invasiva para a coleta do periósteo do palato, possibilitando o isolamento e a expansão das células-tronco mesenquimais. 


AUTORES

José R. M. Ferreira
Cirurgião-dentista – Ufes; Especialista em Periodontia – PUC-Campinas; Mestre em Implantodontia – Unigranrio; Doutor em Ciências dos Materiais pelo IME; Fundador, pesquisador e presidente do Centro de Processamento Celular R-Crio Criogenia S.A.
Orcid: 0000-0002-5192-5623.

Tamara C. L. Castro
Farmacêutica – USF; Depto. de Bioengenharia – R-Crio Criogenia S.A.
Orcid: 0000-0002-5018-4405.

Anna Carolina M. Ferreira de Almeida
Médica veterinária – UniFAJ; Depto. de Bioengenharia – R-Crio Criogenia S.A.
Orcid: 0000-0002-4391-4211.

Daniel N. da Rocha
Cirurgião-dentista – Estácio de Sá; Mestre e doutor em Ciências dos Materiais – IME; Depto. de Bioengenharia – R-Crio Criogenia S.A.
Orcid: 0000-0003-2413-345X.

André A. Pelegrine
Cirurgião-dentista – PUC-Campinas; Especialista em Periodontia e professor – São Leopoldo Mandic; Mestre em Implantodontia – Unisa; Doutor em Clínica Médica – Unicamp; Pós-doutorado – Unifesp.
Orcid: 0000-0001-7935-1062.


RESUMO

Neste trabalho, uma técnica minimamente invasiva para a coleta do periósteo do palato é apresentada, possibilitando o isolamento e a expansão das células-tronco mesenquimais em qualquer fase da vida do indivíduo. O doador com 77 anos de idade foi submetido à biopsia do tecido do palato duro por meio de um bisturi circular, com 3 mm de diâmetro, nas proximidades da região dos pré-molares superiores, sem a necessidade da realização de suturas, devido ao tamanho mínimo de incisão. A cultura celular do periósteo proveniente do palato foi estabelecida com sucesso, chegando ao final da quarta passagem após 53 dias de cultivo. A análise por citometria de fluxo indicou que o periósteo do palato contém população de células-tronco mesenquimais CD73, CD90 e CD105 positivas, além da baixa expressão de marcadores de superfície de células-tronco hematopoiéticas. A expressão do marcador CD105 (76,10%) indica potencial osteogênico dessa fonte de células-tronco mesenquimais, o que foi consubstanciado após indução à diferenciação osteogênica. O periósteo do palato demonstrou-se uma fonte satisfatória de células-tronco mesenquimais de fenótipo “jovem”, mesmo em adultos com idade avançada, e com potencial de aplicabilidade na bioengenharia óssea.

Palavras-chave – Células-tronco; Periósteo; Técnicas de cultura de células.


ABSTRACT

In this work, a minimally invasive technique for collecting the periosteum from the palate is presented, enabling the isolation and expansion of mesenchymal stem cells at any stage of the individual’s life. The 77-year-old donor underwent hard palate tissue biopsy using a circular scalpel, 3 mm in diameter, in the vicinity of the upper premolar region, without the need to perform sutures, due to the minimal size incision. Cell culture of periosteum from the palate was successfully established, reaching the end of the 4th passage after 53 days of culture. Flow cytometric analysis indicated that the palate periosteum contains a population of CD73, CD90 and CD105 positive mesenchymal stem cells, in addition to the low expression of hematopoietic stem cell surface markers. The expression of the CD105 marker (76.10%) indicates the osteogenic potential of this source of mesenchymal stem cells, which was substantiated after induction of osteogenic differentiation. The palate periosteum proved to be a satisfactory source of mesenchymal stem cells of the “young” phenotype, even in adults with advanced age, and with potential applicability in bone bioengineering.

Key words – Stem cells; Periosteum; Cell culture techniques.

Recebido em nov/2021
Aprovado em dez/2021

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